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技術文章您的位置:網站首頁 >技術文章>關于ELISA試劑盒樣本的大致處理辦法!?。?/span>
關于ELISA試劑盒樣本的大致處理辦法?。。?/div>
更新時間:2020-02-07   點擊次數:1521次

一、液體樣本
ELISA試劑盒液體樣本處理準則:一切的液體樣本,用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),假如今后碰到其他的液體樣本,也按這個辦法,納入匯總表。
1、血清:用無菌管搜集,室溫血液自然凝結10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉積,應再次離心。
2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應該再次離心。
3、尿液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
4、胸腹水:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
5、腦脊液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
6、唾液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
7、細胞培養(yǎng)上清:檢測排泄性的成份時,用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
8、牛奶:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管搜集,當即輕輕搖擺,來回輕輕倒置數次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝結。 
二、固體樣本
ELISA試劑盒固體樣本處理準則:稱取1g的固體樣本,用9g的適宜緩沖液溶解,排泄蛋白可以直接離心取上清檢測,細胞內的蛋白,要先搜集細胞,再用適宜辦法破碎,離心取上清測驗。
1、安排標本:切割標本后,稱取1g安排,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝或勻漿器將標本勻漿充沛。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。關于植物安排,不好勻漿的話,就在液氮中充沛研磨;
2、細胞內蛋白樣本
許多待測蛋白不是排泄蛋白,而是存在于細胞內的蛋白,這個時候,要先搜集細胞,洗刷干凈,再破碎細胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細胞
A、動物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度到達100萬/ml左右。經過重復凍融(假如重復凍融,破碎作用不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
B、植物細胞:用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,使細胞濃度到達100萬/ml左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設置破碎2s,冷卻30s的方法,充沛破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。
(2)安排的細胞
切割標本后,稱取1g安排,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝或勻漿器將標本勻漿充沛。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷沉積的細胞三遍。再用上述的細胞破碎辦法破碎細胞。
3、土壤:稱取1g土壤,參加9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手藝將標本充沛混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。假如是測排泄蛋白,直接取上清檢測,測驗細胞內蛋白,要破碎細胞。
4、咽拭子:參加2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉/分),細心搜集上清。分裝一份待檢測,其他冷凍備用,保存過程中如有沉積構成,應再次離心。假如是測排泄蛋白,直接取上清檢測,測驗細胞內蛋白,要破碎細胞。
5.植物標本中相關酶或蛋白的測定:(粗提?。?br />1、新鮮植物安排請在液氮中充沛研磨;
2、參加樣品體積9倍的提取液(pH?7.4?PBS緩沖液),3、?請于4度,8000rpm,離心30分鐘,取上清并暫時保存于4度待用。 
三、ELISA試劑盒樣本搜集注意事項
1、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2、標本收集后趕快進行實驗,若不能馬上進行實驗,可將標本放于-20℃保存,但應防止重復凍融。
3、咱們羅列的是通用的樣本處理辦法,無法涵蓋各種樣本,關于一些特殊樣本,主張實驗人員多參閱已宣布的文獻,自行設計合理的樣本處理辦法。

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