人膜間皮細胞(MeT-5A)
本公司的細胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備 Medium 199 培養(yǎng)基(添加 NaHC031.5g/L, 3.3 nM EGF，870門1/1牛胰島素，20陽1/11^?￡5，

3.87呢八1"1256〇3)，90%;胎牛血清，10%。
2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37°C，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管迅速放入37°C水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL

培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培 養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移

入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。 第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
人膜間皮細胞(MeT-5A)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入lmL培養(yǎng)液后吹勻。移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

 
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行， 后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO 至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 
細胞特性：
1)來源：間皮
2)形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
人膜間皮細胞(MeT-5A)細胞接受后的處理：
1.收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2.請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37°C培養(yǎng)約 2-3h〇
3.棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4. 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5.接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們取得電聯(lián)。
細胞用途：僅供使用。