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酶聯(lián)生物教您如何使用ELISA試劑盒
更新時(shí)間:2024-09-11   點(diǎn)擊次數(shù):1412次

酶聯(lián)生物免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中的ELISA試劑盒,有著靈敏度高、特異性強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)性較好等優(yōu)點(diǎn),酶聯(lián)生物的ELISA試劑盒在所有產(chǎn)品中銷(xiāo)量是高的,本公司ELISA試劑盒僅用于科研,不用于臨床。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中肯定會(huì)有很多科研朋友是不懂的,今天就給大家介紹一下ELISA試劑盒的使用方法。

酶聯(lián)生物教您如何使用ELISA試劑盒



一:實(shí)驗(yàn)操作程序簡(jiǎn)述

1. 準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品;

2. 加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30分鐘;

3. 洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應(yīng)10分鐘;

4. 加入終止液;

5. 15分鐘之內(nèi)度OD值;


二:包被的條件

包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。ELISA試劑盒抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。

通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置放置一個(gè)晚上,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。


三:競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定,可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。


四:抗原和抗體

制備結(jié)合物時(shí)所用抗體一般 均為純度較高的IgG,以免在與酶聯(lián)結(jié)時(shí)其他雜蛋白的干擾。用親和層析純的抗體,這樣全部酶結(jié)合物均具有特異的免疫活性,可以在高稀釋度進(jìn)行反應(yīng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果本底淺淡。如用F(ab')2進(jìn)行標(biāo)記,則更可避免標(biāo)本中RF的干擾。

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