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ELISA試劑盒靈敏度低原因解析
更新時(shí)間:2019-07-01   點(diǎn)擊次數(shù):2083次

上月中旬,貴州大學(xué)王老師在我司訂購了小鼠免疫球M(IgM)elisa試劑盒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,反映陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術(shù)分析如下:

1. 試劑盒必須在有效期內(nèi)使用, 超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào);

2. 試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存,受高溫影響;

3. 試劑、樣品用前未平衡至室溫;

4. 加入試劑的體積和時(shí)間有誤, 移液器計(jì)量不準(zhǔn),吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔;

5. 洗板及加樣過程中,酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力;

6. 孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求 ,反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)整;

7. 洗板次數(shù)過多,或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求;洗滌沖擊力太大。浸泡時(shí)間太長;

8. 顯色劑加量不足或順序顛倒,或混合后加入;

9. 底物作用時(shí)間不夠;

10. 蒸餾水水質(zhì)有問題;

 

實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào),確認(rèn)試劑未過期。不要將試劑盒長時(shí)間置于常溫下,按使用規(guī)定儲(chǔ)藏。

確定所使用的試劑體積正確,加入時(shí)間適當(dāng)。校正移液器,移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快,排放應(yīng)*。

確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等,確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈,確認(rèn)配制洗液的純化水達(dá)到要求且未受污染。

孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃,孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作。保溫期內(nèi)不宜多開門,以免影響保溫。

嚴(yán)格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板,減小洗滌沖擊力,按說明書要求置留洗滌液時(shí)間和洗滌次數(shù)。

顯色劑滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,先加顯色劑 A,后加顯色劑B,不可將A、B液混合后加入準(zhǔn)確定時(shí)間。

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